1.下列可以作为自养微生物氮源的是()
A.N2、尿素 B.牛肉膏、蛋白胨
C.尿素、酵母粉 D.铵盐、硝酸盐
解析：选D。自养微生物需要吸收的是自然界无机物，包括无机碳源和无机氮源。虽然N2可以被固氮菌直接利用，但是固氮微生物不属于自养型微生物。
2.关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是()
A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C.等培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板
D.待平板冷却凝固5～10 分钟后将平板倒过来放置
解析：选A。制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏容易受潮，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却至50 ℃时，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时进行倒平板。平板冷却凝固(大约需5 min～10 min)后还需要倒置。
3.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()
A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针
C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅
解析：选C。此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。
4.(2011年临沂高二检测)能够测定样品活菌数的方法是()
A.稀释涂布平板法 B.直接计数法
C.重量法 D.比浊法
解析：选A。利用稀释涂布平板法能够在不影响生活的情况下将细菌个体从固体培养基上分离出来，并可以繁殖形成菌落，可根据菌落数测定样品活菌数。
5.下列有关平板划线接种法的操作错误的是()
A.将接种环放在火焰上灼烧
B.将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液
C.蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D.接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连
解析：选D。为了避免杂菌污染，蘸取菌液和划线要在火焰旁进行;每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种。在平板划线时不要将最后一区的划线与第一区相连。
6.(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑__________、__________和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、__________、__________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行__________(消毒、灭菌);操作者的双手需要进行清洗和__________;静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________________________________________________________________________。
(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的__________。
(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的__________。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过__________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
解析：(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。
(2)灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌，消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒，紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。
(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合。
(4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。
(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。
(6)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
答案：(1)温度 酸碱度 易培养 生活周期短
(2)灭菌 消毒 损伤DNA的结构
(3)比例合适
(4)鉴定(或分类)
(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
(6)灭菌
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的?
答案：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
(1)培养细菌用的培养基与培养皿。
(2)玻璃棒、试管、烧瓶和吸管。
(3)实验操作者的双手。
答案：(1)(2)需要灭菌;(3)需要消毒。培养基用高压蒸汽灭菌，培养皿、玻璃棒、试管、烧瓶、吸管可以采用干热灭菌法，实验操作者的双手可以用酒精擦拭。
3.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?
答案：可以通过用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
4.为什么需要使锥形瓶口通过火焰?
答案：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
5.平板冷凝后，为什么要将平板倒置?
答案：平板冷凝后，皿盖会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
6.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?
答案：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
7.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗?为什么?
答案：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种;需要;划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
8.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线?
答案：以免接种环温度太高，杀死菌种。
9.在作第二次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
答案：划线后，线条末端的细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
10.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作?(教材P19)
答案：酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。
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